Catégorie : S’occuper des poissons

Incubation

Les œufs sont placés dans l’incubateur à 28°C en salle Microscopie n°84-20-51. Ils y resteront pendant 5 jours avant d’être montés à l’animalerie au 6^e jour.

Au stade approprié, et si nécessaire, effectuer la sélection (fluorescence souvent) des embryons à conserver. Les critères de sélection sont normalement indiqués pour chaque lignée dans la base de données. Demander à l’utilisateur final au moindre doute.

A 24h après fertilisation, les œufs sont désinfectés à la javel (protocole ici) puis replacés dans l’incubateur.

Le milieu doit être propre et ne doit plus contenir de coquilles vides ou d’œufs morts.

Remettre les larves dans l’incubateur.

Changer l’eau de la boîte tous les jours jusqu’à 6 jours.

Au 6^e jour, monter les alevins sur la paillasse de l’animalerie, où elles seront nourries. En effet les larves ont consommé leur réserve vitelline, leurs yeux se sont développés et leur bouche s’est ouverte. Elles sont alors prêtes à recevoir leur première alimentation.

 

Entretien des œufs dans les boîtes de pétri

Les œufs resteront dans leur boîte de pétri et sur la paillasse pendant 2-3 jours. Il est alors nécessaire de changer leur eau d’origine 1 fois le matin et une 1 fois en fin de journée.

L’ancienne eau est donc retirée avec une pipette plastique puis remplacée par de l’eau du Système Principal (serpentin bleu) jusqu’à la moitié de la hauteur de la boîte de pétri.

Chaque changement d’eau est suivi d’un nourrissage avec des paramécies.

A l’aide du pipetboy nourrir les larves avec des paramécies précédemment filtrées (protocole ci-dessous). Les larves doivent être « noyées » de paramécies.

On peut commencer à observer au bout du 2^ème jour, voire du 1^er jour, une petite tache blanche au niveau du ventre des larves signe qu’elles mangent bien les paramécies.

Distinguer les mâles des femelles n’est pas forcément simple, certains animaux étant d’ailleurs parfois impossible à caractériser (le plus souvent ces animaux sont de toute façon peu fertiles, et mieux vaut ne pas les utiliser si possible). Il ne faut donc pas hésiter à demander de l’aide, en particulier si mâle et femelle ne sont pas de la même lignée et qu’une confusion entrainerait un mélange de lignées.

Les différences entre mâles et femelles varient également d’un fond génétique à un autre. Vous trouverez de ce fait ci-dessous différents exemples de critères d’identification. Les principaux:

– mâle plus jaune/rose que la femelle

– mâle plus actif. En particulier, dans les bacs d’accouplement, les mâles ‘courent’ après les femelles, en leur stimulant les flancs.

– mâle au corps plus longiligne / femelle avec le ventre plus rond. Attention cependant, après avoir pondu, le ventre des femelles est beaucoup moins rond. Une femelle qui était très facilement identifiable lorsque les croisements ont été mis en place peut devenir beaucoup plus difficile à repérer.

 

 

 

Demande de croisements auprès d’Emilie

En temps normal, les croisements sont gérés par Emilie (mise en place des croisements, récupération des œufs, rangement des animaux). Pour demander des croisements, utiliser le doc partagé. Pour la première utilisation, demander à Emilie de vous ajouter à la liste des personnes autorisées à accéder au document. Si vous demandez des nouveaux croisements, pensez aussi à avertir directement Emilie.

Si vous deviez gérez vous même vos croisements:

Heure de mise en reproduction : au plus tôt 16h00

Heure de récupération des œufs le lendemain matin : au plus tard 11h00 – 12h00 (au-delà les poissons commenceront à montrer des signes de souffrance)

Liste du matériel nécessaire :

• Boite
• Panier
• Séparateur
• Couvercle
• Scotch coloré pour inscrire la provenance des poissons
• Eau d’élevage

1. Préparation des boites

Ajouter de l’eau (serpentin bleu) presque jusqu’en haut de la boite (toute la grille doit être couverte).

L’eau doit être prise dans le tuyau bleu souple (serpentin). Cette eau est de l’eau du système, qui a été filtrée et stérilisée aux UV. Le débit de ce tuyau est faible, et remplir beaucoup de boites peut prendre du temps. Il est tentant de prendre de l’eau directement au pied des racks, dans la grande cuve bleue. Cela pose 2 risques :

• Un risque sanitaire : cette eau est un mélange de toutes les sorties des aquariums du rack, elle a donc le statut sanitaire du pire aquarium du rack
• Un risque de mélange de lignées : des œufs peuvent sortir des aquariums et des poissons grandissent dans la cuve bleue. Si vous prenez un adulte, vous le verrez, mais si vous prenez des alevins ou des œufs, vous ne les verrez pas. Ils seront donc collectés en même temps que vos œufs du jour, conduisant à un mélange de lignées.

La conclusion est qu’il faut utiliser l’eau du serpentin bleu. Si vous n’avez vraiment pas le temps, vous pouvez prendre de l’eau dans le bac bleu (utiliser une boite vide pour prendre l’eau). Verser là ensuite dans votre boite d’accouplement à travers le tamis disponible sur l’étagère, au-dessus de l’évier. Cela n’évitera pas le risque sanitaire, mais filtrera d’éventuels œufs ou alevins.

2. Étiquetage

L’étiquette est à mettre impérativement sur le panier contenant les poissons

3. Mettre les poissons

Une fois l’eau mise dans toute les boites, placer les poissons en mettant les males d’un côté et les femelles de l’autre de part et d’autre du séparateur centrale.

Penser à mettre les couvercles afin que les poissons ne sautent pas de la boîte

4. Noter les croisements

Si ce n’est déjà, noter, sur le fichier de suivi en ligne, les reproductions effectuées

5. Accouplement

Le lendemain dès que la lumière de l’animalerie s’allume enlever les séparateur en pensant à remettre les couvercles.

Les mâles vont « courir » après les femelles en essayant de les ramener là où il y a peu d’eau. La fécondation des œufs est externe. Les œufs fécondés tombent alors à travers le panier.

6. Récupérer les œufs

Au préalable, préparer les boîtes de pétri :

Si les embryons vont être utilisés pour des expériences, noter sur le couvercle de quoi les identifier, idéalement, noter également le fond e la boite.

Si les embryons vont être élevés :

• Annoter au feutre noir le couvercle et le fond de la boîte en indiquant :
• Le numéro de la nouvelle lignée
• La date du jour de ponte
• Le numéro de Batch et d’aquarium du père, Le numéro de Batch et d’aquarium de la mère.

Une fois toutes ces informations notées mettre un peu d’eau dans les boîtes de pétri avec l’eau du système (serpentin bleu).

Les boîtes de pétri sont alors prêtes pour recevoir les œufs.

Récupérer les œufs en versant l’eau de la boite concernée dans la petite passoire en plastique préalablement rincée. Il y aura certainement des fèces que l’on peut enlever en rinçant délicatement mais abondamment avec l’eau du serpentin bleu.

Une fois que les œufs sont propres, retourner la passoire dans la boîte de pétri associée en appuyant sur le dessus afin de décoller les œufs de la passoire avec l’eau de la boîte de pétri.

Refermer la boîte et mettre de côté.

Rincer correctement la passoire afin de ne laisser aucun œuf. Dans le doute changer directement de passoire puis recommencer la manip pour les autres lignées.

Il est fortement conseillé de s’organiser, de faire la récolte des œufs lignée par lignée dans le but d’éviter tout mélange des œufs.

Une fois terminé placer les œufs dans l’incubateur et signaler à la personne concernée qu’il y a des œufs pour elle.

Si des œufs sont potentiellement mélangés :

Ne pas ignorer la situation, cela peut arriver, dans un premier temps expliquer la situation à la personne concernée par la lignée afin qu’elle soit au courant et puisse prendre la meilleure décision.

Les lignées où l’on a un doute ne sont surtout pas à mettre en élevage dans l’animalerie, il vaut mieux recommencer la reproduction en question la semaine suivante.

7. Rangement des couples

Ranger avec attention les couples dans leur boîte respective, pour cela, prendre une épuisette propre et les ranger lignée par lignée en s’assurant de ne pas faire de mélange.

Une fois tous les poissons remis à leur place, nettoyer/rincer soigneusement à l’eau chaude  toutes boites et panier. Les mettre à sécher sur le bord de la paillasse.

Une fois tous les poissons remis à leur place, s’il n’y a pas d’œufs à récupérer nettoyer/rincer toutes boites et les mettre à sécher sur le bord de la paillasse.

But : éliminer les pathogènes éventuellement présents à la surface du chorion. Indispensable pour des animaux venant d’une autre animalerie avant qu’ils puissent être intégrés au système principal de notre animalerie. Conseillé comme prophylaxie pour les pontes issues de notre animalerie et destinées à être élevées.

 

Principe : traitement cours à l’eau de Javel diluée. Le traitement doit être suffisant pour éliminer les pathogènes à la surface du chorion, mais pas trop violent pour ne pas tuer les embryons eux-mêmes.

 

Protocole :

Se pratique sur des embryons entre 5 heures post fertilisation et 24 heures post fertilisation.

Retirer les embryons morts ou non fécondés, nettoyer la boite (retirer les écailles, excréments, etc.).

Préparer une solution de Javel diluée à partir de Javel fraiche (moins de trois mois, conservée au frigo) : les berlingots de Javel du commerce (Javel Lacroix non parfumée) sont actuellement à 4.8%. Dans ce cas, diluer 400 fois (50 microlitres de Javel dans 20 mL d’eau poisson).

(La teneur en chlore peut être exprimée dans d’autres unités, un convertisseur est disponible ici)

Verser la solution de Javel diluée dans un boite de pétri ou un bécher, suffisamment large pour pouvoir y tremper le fond d’une passoire. Placer les œufs à désinfecter dans la passoire et les tremper dans la solution de Javel pendant exactement 2 minutes, en remuant légèrement. Rincer abondamment (jet d’eau ou bains successifs dans de l’eau poisson).

Remettre les œufs dans une boite de pétri propre et vérifier sous la loupe l’aspect des chorions. Ils doivent être lisses et propres, en comparaison d’embryons non javellisés.

Une fois passés à la Javel, les chorions durcissent et l’alevin ne pourra éclore seul. Il faut donc, avant 48 hpf, déchorionner mécaniquement avec des pinces. Il est sinon possible d’ajouter des traces de pronase dans l’eau pour faciliter l’éclosion.

Rappel: tous les événements inhabituels sont à consigner dans le registre de visite. Si vous retirez un animal du système, indiquez dans le cahier: la date, l’aquarium dans lequel l’animal se trouvait, la raison de sa mise à l’écart.

Sont à retirer immédiatement des aquariums et à placer dans un bac isolé (bac d’accouplement rempli d’eau du système):

• les poissons morts, les poissons auxquels il manque une partie du corps, les poissons immobiles, ne bougeant pas meme lorsque stimulés.

• les poissons présentant l’un des symptômes suivants: queue tordue/déformée, poisson émacié, lordose ou scoliose sévère, lésion, perte d’écailles, cataracte, yeux exorbités, tumeur, enflement sévère de l’abdomen, hérissement des écailles

En cas de problème, voir les procédures d’urgence.

• Nourrir les alevins
• Nourrir les adultes
• Vérifier l’absence d’animaux morts, malades ou au comportement anormal.
• Vérifier les paramètres de l’eau (Température, conductivité, pH) sur le système principal et le stand alone et les noter sur les cahiers corresondant (une fois par jour).
• Vérifier l’absence de panne évidente (l’eau coule dans les aquariums, absence de fuite d’eau / d’eau au sol)

Le point clé est de ne pas TROP nourrir (les alevins comme les adultes). Pour les adultes, toute la nourriture doit avoir été consommée dans les 5 minutes (les alevins prennent plus de temps, mais tout devrait avoir disparu en 30 minutes).

Mis à part le Fish Gun, la nourriture se trouve dans le réfrigérateur, sous la paillasse des accouplements. Une boite avec la nourriture du système principal, une avec la nourriture du stand alone. Dans chaque boite, plusieurs tailles d’aliment (identifiées par un code couleur). Chaque aquarium porte un scotch (rouge, vert ou bleu) indiquant quel aliment donner. Pour l’aliment le plus fin (bleu), utiliser le petit coté de la cuillère verte.

L’aliment pour adulte (rouge) est du Gemma 300. L’aliment intermédiaire (vert) est du Gemma 300 mixé (mettre 25 ml de Gemma 300 dans le moulin à café, mixer 5 à 10 secondes). L’aliment le plus fin (bleu) est du Gemma 75.

Les réserves de nourriture se trouve en chambre froide. En entrant, plutot vers le fond, le long du mur de gauche, une étagère du bas marquée ‘Emilie’. Un carton ‘Skreting’, sachets de Gemma à l’intérieur.

2 fois par semaines, les mardi et vendredi, pour le repas du midi, remplacer l’aliment pour adulte par celui contenu dans le pot bleu, présent dans le réfrigérateur de l’animalerie (mélange de plein d’aliments différents, pour diversifier la nourriture).